西藏株小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要

[背景]小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,严重威胁我国养羊业的发展.[目的]原核表达PPRV H蛋白,并制备其多克隆抗体.[方法]根据GenBank中PPRV西藏株h基因序列,对其进行密码子大肠杆菌偏爱性优化,采用两步PCR法全化学合成全长h基因.将测序验证正确的h基因克隆至原核表达载体pET-28a、pET-30a、pET-32a,转化E.coli BL21(DE3)并利用IPTG诱导H蛋白表达.以经SDS-PAGE割胶纯化的重组H蛋白免疫新西兰大白兔制备抗PPRV H蛋白多克隆抗体.[结果]重组E.coli [pET-28a(-30a,-32a)-H]表达的重组H蛋白相对分子质量分别约为70、68和86 kD;诱导7h时PRRV H蛋白表达量最高,而且主要以包涵体形式表达;重组E.coli (pET-30a-H)表达的H蛋白经SDS-PAGE割胶纯化后免疫新西兰大白兔制备的多抗血清能与表达的重组H蛋白发生特异性反应;ELISA法检测抗体效价在1:6 400-1:25 600之间.[结论]原核表达了PPRV H蛋白,并制备了高效价的抗H蛋白多克隆抗体,为进一步研究PPRV H蛋白的功能及H蛋白的线性B细胞表位作图奠定了基础.