采用随机突变方法对β-琼胶酶YM01-3活性位点的研究

摘要

[背景]琼胶酶是一种多糖水解酶,在保健食品、医药、科研及化妆品等行业极具价值.本实验室发现来源自嗜琼胶卵链菌(Catenovulum agarivorans)的β-琼胶酶YM01-3具有较高的酶活性,在最适条件下的比酶活可达到1.14× 104 U/mg.[目的]探讨不同位点的突变对β-琼胶酶YM01-3酶活力的作用,发现影响其酶活力的新位点.[方法]通过易错PCR在短芽孢杆菌(Bacillus brevis)表达系统中构建随机突变文库,从约10 000个克隆中筛选出227株有效突变体,从中选取80株进行测序.[结果]对突变体序列进行分析和定点突变验证发现,137位和237位氨基酸发生突变后酶活力丧失90％以上.[结论]位于催化腔内的137位和237位氨基酸,对于维持β-琼胶酶YM01-3酶活力具有重要作用.该研究结果为β-琼胶酶的催化机理研究及分子改造提供了借鉴.