Twist1稳定表达细胞株的建立及对乳腺癌细胞上皮-间充质转变的影响

摘要

目的:构建Twist1的慢病毒真核表达载体,并建立稳定表达Twist1的乳腺癌细胞株,研究Twist1在乳腺癌中对上皮-间充质转变(EMT)的影响.方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Twist1编码序列,克隆到慢病毒pCDH载体,构建成pCDH-Twist,转染293T细胞,Western印迹鉴定pCDH载体介导的Twist1的表达;包装病毒载体,感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响.结果:经BamH Ⅰ、EcoRⅠ双酶切及测序证实得到pCDH-Twist1表达载体,Western印迹实验发现Twist1在293T细胞内表达;嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的ZR75-1细胞株.结论:构建了pCDH-Twist的真核表达载体并建立了稳定表达Twist1的ZR75-1细胞,为进一步研究Twist1在EMT过程中的机制奠定了基础.