幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定

摘要

目的 :克隆幽门螺杆菌 (Hp) ure B基因并构建其原核表达系统。方法 :采用高保真 PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株 Y0 6中扩增 ure B基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列 ,构建 p ET32 a的 ure B表达载体 ,在 E.coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达 ,采用 Hp全菌抗体的 Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果 :所克隆的 ure B基因与报道的相应核苷酸序列同源性为 96.88%～ 97.82 % ,氨基酸序列同源性高达 99.65 %～ 99.82 %。p ET32 a- ure B- BL2 1DE3系统的 Ure B融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的4 0 %左右。Ure B融合蛋白能与 Hp全菌抗体发生结合反应 ,免疫家兔能获得高效价抗体。结论 :本研究成功地构建了 Hp ure B高效表达系统 ,所表达的 Ure B融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性 ,可作为 Hp疫苗的抗原。