重组刚地弓形虫GRA10蛋白的表达纯化与鉴定

摘要

为构建表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)致密颗粒蛋白10(dense granule protein 10,GRA10)N端(AA 4-478)的重组质粒并在大肠杆菌中表达纯化该重组蛋白,以用于后续的诊断检测试剂盒设计。根据GRA10的基因序列设计并合成特异性引物,通过PCR方法从弓形虫ME49虫株cDNA中扩增GRA10(AA 4-487)的编码片段,利用同源重组的方法将其连接到pE-SUMO载体上。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)后并用IPTG诱导SUMO-GRA10的表达,产物通过SDS-PAGE分析并用亲和层析方法纯化,然后采用Western blot分析其免疫反应性。结果表明,已成功构建了表达弓形虫GRA10蛋白的重组质粒并利用原核表达系统表达纯化了具有良好免疫反应性的蛋白,为弓形虫病诊断奠定了基础。