rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP转染犬骨髓间充质干细胞的比较

摘要

【目的】研究不同血清型腺相关病毒(rAAV)载体介导的增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)对体外培养犬骨髓间充质干细胞(MSC)的转染效率及其毒性作用。【方法】应用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养犬MSC,倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态,透射电镜观察其超微结构,流式细胞仪鉴定其表面标记物。取第3代MSC,以MOI为104～105 v.g./cell的rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP进行转染,3、7、21 d后荧光显微镜观察检测转染效率;MTT法检测rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP对MSC的毒性作用。【结果】原代及传代培养的MSC呈梭形外观,具有较强的增殖能力。MSC超微结构显示其胞体较小,细胞核/浆比例大,胞浆少,染色质较疏松。细胞表面抗原CD29、CD44表达阳性,CD34表达阴性。随MOI的增加及时间的延长,rAAV1-EGFP、rAAV2-EGFP对犬MSC的转染效率逐渐增加,rAAV2-EGFP转染效率明显高于rAAV1-EGFP(P0.05)。【结论】相对犬MSC,rAAV2是一种比rAAV1更优越的转基因载体,而且对细胞生长无明显抑制,作为组织工程种子细胞的载体是安全可行的。