MHC-Ⅱ类分子与hTSH受体共表达系统的建立

摘要

目的 :应用电击基因导入法 ,建立 MHC- 类分子与 h TSHR共表达体系 （h Ml2 ） ,为 GD发病机制的研究奠定基础。方法 :采用电击基因导入法将质粒 p CRTM3- h TSHR转染于 M12细胞 （H- 2 d） ,应用 G4 18筛选出阳性细胞 ,经有限稀释获得单克隆细胞株。用逆转录聚合酶链反应 （RT- PCR）法检测单克隆细胞内 h TSHR胞外段 m RNA的表达 ;用甲亢病人血清粗提 Ig G及 b TSH刺激后测定上清中 c AMP值以检测单克隆细胞株表达的 h TSHR是否具有天然 h TSHR功能。结果 :应用有限稀释法获得 14株单克隆细胞。RT- PCR结果显示 :3号、5号、6号、8号、11号细胞内有高水平的 h TSHR胞外段 m RNA的转录。应用甲亢病人血清粗提 Ig G及 b TSH刺激后 ,6号、8号细胞上清中c AMP值明显升高 ,与对照组之间存在显著差别 （P＜0 .0 5 ）。结论 :应用电击基因导入法成功地建立了 MHC- 类分子与 h TSH受体共表达体系。