泽泻ISSR反应体系的建立与优化

摘要

以四川泽泻为实验试材，采用改进的CTAB法提取了泽泻的高质量总DNA模板，克服了泽泻中所富含的酚类物质的影响．对泽泻ISSR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选，建立了标记位点清晰、稳定、重复性好、可用于泽泻ISSR-PCR分析的最适反应体系，它们是：25μLPCR反应体系中，10×Taq酶配套缓冲液，IUTaqDNA聚合酶，1．8～2．0mmol／L MgCl2，100μmol／LdNTP，0．3μmol／L引物，DNA模板约10-20ng，退火温度在52-60％；