龙头鱼ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要

以Tris平衡酚-氯仿法提取的龙头鱼基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验法,对影响PCR扩增体系的dNTPs、模板DNA、引物浓度和Taq DNA聚合酶4种试剂的用量作为独立因素进行优化,创建了最适合龙头鱼的ISSR-PCR反应体系.结果 表明:20μL的PCR反应液的组分和用量为含Mg2+的10×PCR Buffer 2.0μL,dNTPs2.5 μL,Taq DNA聚合酶0.2μL,引物1.0μL,DNA模板1.4μL,双蒸水12.9μL时扩增条带最清晰.这一实验结果为龙头鱼后续开展ISSR遗传多样性分析奠定了基础.