黄芩素通过PI3K/AKT通路增强三氧化二砷对肝癌细胞的促凋亡作用

摘要

目的:探讨黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡作用及其可能的作用机制.方法:采用MTT方法检测不同作用浓度及作用时间的黄芩素、As2 O3单用和联用对肝癌高转移细胞HCCLM9、肝癌低转移细胞MHCC97L的增殖抑制率,并根据联合用药q值判断两药联用的性质;流式细胞术检测肝癌细胞的周期分布;Tunel技术检测肝癌细胞的凋亡情况;Real-Time PCR和Western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-6、caspase-9的mRNA和蛋白质水平以及PI3K、AKT和P-AKT蛋白的表达情况.结果:黄芩素、As2O3单药及联合后均能明显抑制HCCLM9和MHCC97L细胞增殖能力,但两药联合作用更强,且呈明显时间和剂量依赖性效应.两药单用及联合均能够明显导致肝癌细胞Go/G1期停滞,Tunel检测到细胞凋亡率升高,且两药联合作用强于单药.两种药物同时处理后肝癌细胞的caspase-3、caspase-6及caspase-9的mR-NA和蛋白水平表达显著升高而PI3K、p-AKT蛋白表达下降.结论:黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡的作用,同时引起PI3K、p-AKT表达的下调及caspase-3、caspase-6及caspase-9表达的上调.推测黄芩素可能是通过激活Caspase凋亡信号,同时抑制PI3 K/AKT通路增强As2O3对肝癌细胞促凋亡的作用.