BDNF-AS基因及其突变体对HepG2细胞增殖和相关信号通路的影响

摘要

目的:探讨BDNF-AS基因对肝癌细胞HepG2增殖的作用,以及对细胞内信号通路的影响.方法:采用BDNF-AS过表达质粒或BDNF-AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒转染肝癌细胞系HepG2,建立过表达BDNF-AS及其突变体的稳转细胞系,采用qRT-PCR方法检测HepG2细胞中BDNF-AS和BDNF mRNA水平,采用Western blot检测细胞中BDNF蛋白水平,采用EdU掺入实验评价细胞增殖情况,采用Western blot方法检测细胞内相关信号通路的活化情况.结果:稳定表达BDNF-AS及其突变体的细胞其BDNF-AS水平显著上调,而只有稳定表达BDNF-AS的细胞其BDNF mRNA水平显著下调,细胞增殖受到抑制.各组细胞BDNF蛋白水平无显著差异.各组细胞中PDK1和PKC底物的磷酸化水平上调,而过表达BDNF-AS组与突变组之间有差异.各组细胞中CK2底物的磷酸化水平下调,而过表达BDNF-AS组与突变组之间无显著差异.结论:HepG2细胞中稳定表达的BDNF-AS可能通过与BDNF基因的完全互补序列调控BDNF mRNA表达水平.稳定表达的BDNF-AS通过干扰CK2底物的磷酸化影响HepG2细胞的增殖能力,并且可能通过促进PDK1、PKC底物的磷酸化,影响HepG2细胞的其他生物学行为.