红景天苷通过miR-99a-5p/IGF-1R信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

摘要

目的:探讨红景天苷调节微小RNA-99a-5p(microRNA-99a-5p,miR-99a-5p)/胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人鼻咽上皮细胞(NP69)、鼻咽癌细胞系(CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2)中miR-99a-5p、IGF-1R信使RNA(mRNA)表达水平;将对数期HNE2细胞分为对照组(常规培养HNE2细胞)、红景天苷低浓度组(含HNE2细胞的培养基中加入0.5μg/mL的红景天苷)、红景天苷中浓度组(含HNE2细胞的培养基中加入1μg/mL的红景天苷)、红景天苷高浓度组(含HNE2细胞的培养基中加入2μg/mL的红景天苷)、模拟物(mimics)-NC组(HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics阴性对照)、miR-99a-5p mimics组(HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics)、红景天苷高浓度+抑制剂(inhibitor)NC组(含HNE2细胞的培养基中加入2μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor阴性对照)、红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组(含HNE2细胞的培养基中加入2μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor)。qRT-PCR法检测各组HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平;细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验、蛋白免疫印迹法分别检测HNE2细胞增殖能力、凋亡率、侵袭能力、迁移能力、IGF-1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p与IGF-1R的靶向关系。结果:与NP69细胞相比,CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2细胞系中miR-99a-5p表达水平降低,IGF-1R mRNA表达水平升高(P<0.05),其中HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平与NP69细胞差异更明显(P<0.05);与对照组相比,红景天苷低、中、高浓度组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率依次升高(P<0.05),IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率依次降低(P<0.05);与对照组、mimics-NC组相比,miR-99a-5p mimics组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率降低(P<0.05);与红景天苷高浓度组、红景天苷高浓度+inhibitor NC组相比,红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率升高(P<0.05);miR-99a-5p与IGF-1R存在靶向关系。结论:红景天苷可能通过促进miR-99a-5p表达,靶向抑制IGF-1R表达,参与抑制HNE2细胞增殖、侵袭、迁移,并促进HNE2细胞凋亡。