低盐对青蛤抗氧化酶和ATP酶的影响及碳酸酐酶基因的克隆与表达

摘要

为探讨青蛤（CyclinasinensisGmelin）耐低盐适应机制,研究了低盐（盐度8）和正常盐度（盐度25）条件下青蛤96 d内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPH-Px）、Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase酶活性、丙二醛含量和碳酸酐酶mRNA时序性表达变化。实验结果表明:（1）低盐条件与正常盐度相比,青蛤超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性总体呈现先上升后下降的趋势,变化具有显著性差异（P＜0.05）;Na+/K+-ATPase活力在96 d内一直呈下降趋势,在第48天下降至最小值,显著低于初始酶活性值（P＜0.05）;实验开始后的第6、12、24天, Ca2+/Mg2+-ATPase酶活性较初始酶活性无显著性变化（P＞0.05）,第48天显著升高（P＜0.05）;MDA含量呈现先上升后下降的趋势,第12、48和96天时显著高于初始酶活性（P＜0.05）。（2）利用RACE技术克隆了青蛤碳酸酐酶基因（CsCA）的全长cDNA序列,共1672 bp,包含738 bp开放阅读框,编码245个氨基酸,系统进化树结果表明青蛤与其他瓣鳃纲碳酸酐酶基因同源性高,说明其进化保守。qRT-PCR结果显示,低盐条件下,青蛤碳酸酐酶基因mRNA在第24天显著高于初始表达量（P＜0.05）,其他时间也高于初始值,但差异不显著（P＞0.05）。综上所述,在适应低盐环境时,青蛤鳃组织中抗氧化酶最先被激活并出现反应,活力增强,随着时间的增加,抗氧化酶活性受抑制,随后ATP酶活性升高;碳酸酐酶基因在青蛤长期适应低盐环境中发挥重要作用。本研究结果为青蛤养殖产业可持续发展提供理论指导。