Linc00339对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响

摘要

目的探讨Linc00339对三阴乳腺癌发生发展的作用及其相关分子机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人乳腺正常上皮细胞和乳腺癌细胞中Linc00339的表达水平;采用质粒转染试验在MDA-MB-231细胞中过表达Linc00339;采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MDA-MB-231细胞的活性;采用黏附试验、Transwell试验分别检测MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移能力;采用Western blot检测MDA-MB-231细胞中APC、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平;采用qRT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中miRNA-135a、miRNA-135b及miRNA-138的表达水平;将体外转染成功的MDA-MB-231细胞接种于裸鼠体内建立荷瘤裸鼠模型,观察和测量肿瘤块的体积和重量,采用Western blot检测裸鼠瘤体组织中APC、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平,采用qRT-PCR法检测裸鼠瘤体组织中miRNA-135a、miRNA-135b及miRNA-138的表达水平。结果与乳腺正常上皮细胞组（Hs578Bst）相比,乳腺癌细胞组（MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231）的Linc00339表达水平均显著上调,以三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞尤为显著;转染实验结果表明与pcDNA3.1组相比,Linc00339转染显著上调Linc00339表达水平并可显著增加MDA-MB-231细胞的活力;Linc00339过表达能够显著增加MDA-MB-231细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭能力,增加荷瘤裸鼠肿瘤块的体积和重量;Western blot结果均表明体内外Linc00339过表达能够下调APC蛋白的表达和上调Wnt/β-catenin信号蛋白的表达,同时qRT-PCR结果表明Linc00339过表达能够上调miRNA-135b表达水平,而对miRNA-135a和miRNA-138无影响。结论 Linc00339可能通过miR-135b/APC介导的Wnt/β-catenin信号通路促进三阴乳腺癌的发生和发展。