人膀胱癌顺铂耐药细胞株T24/CDDP的建立和鉴定及耐药机制研究

摘要

目的建立人膀胱癌顺铂（CDDP）耐药细胞株T24/CDDP,鉴定其生物学特性,并探讨其对CDDP耐药的机制。方法采用CDDP浓度逐步递增联合大剂量CDDP冲击方法,在体外连续诱导、培养膀胱癌细胞株T24细胞,建立对CDDP耐药的细胞株T24/CDDP。CCK-8法测定T24/CDDP细胞对CDDP的耐药指数;绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间;流式细胞术检测T24细胞和T24/CDDP细胞的细胞周期比例;Western blot测定细胞中蛋白激酶Cα（PKCα）和P-糖蛋白（Pgp）蛋白的表达。结果 T24细胞在体外采用CDDP浓度逐步递增联合大剂量CDDP冲击方法连续诱导、培养,历时11个月,成功建立了对CDDP耐药的细胞株T24/CDDP,其耐药指数为4.17。T24细胞和T24/CDDP细胞的群体倍增时间分别为（33.61±0.41）h和（39.94±0.63）h,两者比较差异有统计学意义（t=14.59,P=0.00）。与T24细胞相比,T24/CDDP细胞的S期细胞比例减少[（30.63±2.74）%vs（35.38±3.31）%],但差异无统计学意义（P＞0.05）。G0/G1期细胞比例增加[（60.42±3.25）%vs（47.25±4.17）%],G2/M期细胞比例减少[（8.95±2.81）%vs（17.37±3.46）%],差异均有统计学意义（t=4.31,P=0.006;t=3.27,P=0.015）。T24细胞和T24/CDDP细胞中均有PKCα和P-gp蛋白的表达。与T24细胞相比较,T24/CDDP细胞中PKCα和P-gp蛋白表达水平均显著升高[（3.12±0.11）vs（1.37±0.06）,t=24.19,P=0.00;（1.98±0.08）vs（0.47±0.03）,t=30.61,P=0.00]。结论 T24/CDDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性,其耐药机制可能与细胞中PKCα和P-gP蛋白的过度表达有关。