转基因枸杞中蛋白酶体糜蛋白酶样活性的研究

摘要

利用提取的转基因枸杞和正常枸杞蛋白与蛋白酶体的特异性荧光底物Suc-LLVY-AMC 室温孵育,于360nm(激发光)/460nm(发射光)波长下测定荧光值的方法,研究了转基因枸杞和正常枸杞中蛋白酶体糜蛋白酶活性的差异及其特异性抑制剂MG115对枸杞中蛋白酶体活性的影响.结果表明表达HIV壳体蛋白的转基因枸杞蛋白酶体活性是空载体对照转基因枸杞蛋白酶体活性的3.6倍,是正常枸杞的4.2倍.10μM的MG115对表达HIV壳体蛋白的转基因枸杞蛋白酶体活性抑制率为87%,携带空载体对照的转基因枸杞抑制率为74%,而对正常枸杞抑制率仅为8.6%;50μM的MG115抑制作用与10μM的相比没有明显变化.这一结果将为利用蛋白酶体抑制剂提高转基因枸杞悬浮细胞HIV-ICA含量的研究提供理论依据.