RNAi抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞乳腺癌耐药蛋白基因研究

摘要

目的利用RNAi技术干扰耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的BCRP(乳腺癌耐药蛋白)基因的表达,观察MCF-7/ADR细胞BCRP的mRNA变化,BCRP蛋白的表达以及对阿霉素耐药性的变化。方法设计3条不同(BCRP1,BCRP2,BCRP4)的RNA干扰链,构建出pGenesil-BCRP-EGFP(绿色荧光蛋白)质粒,设立对照组,空白质粒(HK)组及RNAi干扰组进行实验。半定量RT-PCR检测不同组的BCRP的mRNA水平,Western-blot检测不同组的BCRP蛋白的水平,MTT法分析RNAi干扰组药敏性变化。结果RT-PCR和Western-blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制,以BCRP1组干扰效果明显,明显弱于其他组。MTT比色法结果显示:BCRP1组对阿霉素的药物敏感性明显提高,与对照组差异有显著性(P<0.05)。结论RNAi能抑制BCRP基因转录和翻译水平的表达,其中以BCRP1的干扰效果明显,能明显提高MCF-7/ADR对阿霉素的药物敏感性。