重组水蛭素的突变及突变体部分性质研究

摘要

以基因突变结合动力学分析的方法研究了水蛭素空间结构及其与凝血酶的相互作用．采用基因定点突变和随机突变的方法得到两个重组水蛭素突变体，并从抗酰胺水解活性，抗凝血酶活力和稳定性三个方面，比较研究了重组水蛭素ｒＨＶ２中４７位和１１位两个氨基酸残基对其稳定性和抑制能力的影响．将ｒＨＶ２中Ｇｌｎ１１和Ａｓｎ４７分别突变为Ｈｉｓ１１和Ｌｙｓ４７后，ｒＨＶ２－Ｈ１１生物活力降低３０％，ｒＨＶ２－Ｋ４７生物活力提高６１％．测定抑制常数Ｋｉ表明，ｒＨＶ２－Ｈ１１突变体Ｋｉ值升高１４倍，ｒＨＶ２－Ｋ４７突变体Ｋｉ值降低１４倍，两个突变体的热稳定性均有所增强，ｒＨＶ２－Ｈ１１在酸性和碱性条件的稳定性降低．分析实验结果，可以认为：①４７位的Ｌｙｓ可能是通过氢键和静电两种作用力同时影响着水蛭素的三维结构和其与凝血酶的结合．②１１位氨基酸可能是水蛭素分子中另一个重要位点．