基于响应面法优化以ABTS为底物的漆酶测定方法及其应用

摘要

为探索一种最佳的漆酶酶活力测定反应体系条件,从而确定更为准确的酶活力测定方法,以漆酶标品为研究对象,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物,采用分光光度法确定漆酶标品稀释倍数与ΔOD值之间的线性关系以及最佳酶促反应时间,选取酶活力测定反应体系中的缓冲液浓度、pH值以及ABTS浓度作为影响因素进行单因素优化,以所测定漆酶酶活力为响应值进行响应面优化与评估。结果表明,漆酶标品稀释倍数在30~80之间与吸光度变化值线性关系良好,酶促反应中最佳酶活力测定时间为起始3 min。反应体系中当醋酸-醋酸钠缓冲液浓度为50 mmol/L、pH 4.0、底物ABTS浓度为1 mmol/L时,所测得漆酶标品酶活力最为接近真实值,为1 040.49 U/g。将优化好的反应条件应用于生产漆酶微生物的酶活力检测中,从而确定菌株的产酶性能,所优化的方法在测定微生物产酶活性方面十分稳定,具有可行性。