重组人vWF A3-GPI融合蛋白在CHO细胞膜上的表达及其生物学活性

摘要

目的在CHO中表达人vWFA3-GPI融合蛋白并测定其生物学活性,以期获得能够锚定至细胞表面,并引导其黏附于受损血管壁的分子。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-vWFA3-GPI,转染CHO细胞。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。应用CCK8法测定其结合胶原的能力及经不同浓度PI-PLC处理后的变化情况。结果vWFA3-GPI融合蛋白能够锚定在CHO细胞膜上,并具有很好的胶原结合活性;PI-PLC处理后,其胶原结合活性降低,降低程度与PI-PLC浓度成正比。结论CHO中高效表达的人vWFA3-GPI融合蛋白具有良好的生物学功能,能有效地锚定至细胞表面,并保持良好的胶原结合效应,可作为引导细胞黏附于受损血管壁的分子。