地中海拟无枝酸杆菌甲基丙二酰CoA转羧基酶的纯化及酶学特性

摘要

经硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素吸附，磷酸纤维素吸附和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ分子筛层析四步从地中海拟无枝酸杆菌纯化得到电泳纯ＭＣＴ酶，酶比活力为３．２１Ｕ／ｍｇ，纯化倍数１７８，酶活回收１４．９％。酶反应的最适ｐＨ和温度分别为７．０和３５℃。纯化ＭＣＴ酶对底物丙酰ＣｏＡ和草酰乙酸的米氏常数分别为０．０２７ｍｍｏｌ／Ｌ０．０３５０９ｍｍｏｌ／Ｌ．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０测定酶分子量为２０００００，ＳＤＳ－取丙烯酰胺电泳凝胶显示一条分子量６８０００的亚基蛋白带，说明该酶由三个等大小亚基组成．薄层等电聚焦测定酶等电点为ｐＩ６．０．二价金属离子Ｃｏ￣（２＋）和Ｆｅ￣（３＋）促进酶活力．采用原生质体裂解的方法发现ＭＣＴ酶是可能分布于胞浆和细胞膜上．