甲钴胺对VZV病毒感染施万细胞中朊蛋白和TNF-α转换酶表达的影响

摘要

目的:探究感染水痘-带状疱疹病毒（VZV）对人施万细胞（hSC）朊蛋白（PrPC）、肿瘤坏死因子-α转换酶（TACE）和肿瘤坏死因子-α受体1（TNFR1）表达的影响，及甲钴胺（MCbl）的调节作用。方法:将传代培养的hSC分为：空白对照组、VZV感染组、VZV感染加MCbl干预组、VZV感染PrPC基因（Prnp）siRNA转染细胞组、VZV感染Prnp-siRNA转染细胞加MCbl干预组。设计合成Prnp的siRNA序列转染hSC,构建PrPC表达下调的hSC模型。以感染复数为1.0的VZV分别感染后4组细胞3 d后，加药组分别加入250μg/ml的MCbl干预。感染7 d后采用CCK-8法评估细胞活力，real time RT-PCR检测Prnp mRNA表达，Western Blot分析PrPC糖基化的变化，免疫荧光双染检测TACE和TNFR1的表达，TACE试剂盒检测其酶活性的变化，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞上清液中可溶性TNFR1（sTNFR1）的浓度。结果:与对照组比较，感染组细胞活力明显下降（P＜0.05）。感染组细胞Prnp的mRNA表达与对照组相比上调了2.7倍，PrPC的单糖基化条带密度明显增加。TACE染色颗粒明显变小，TACE活性为对照组的36%,TNFR1表达与对照组比较明显增多，sTNFR1含量为（16.77±4.57） pg/ml。感染加药组Prnp mRNA表达上调3.7倍，显著高于感染组，PrPC向单糖基化迁移的比例较感染组明显减少。TACE染色颗粒变大，且TACE的活性为对照组的76%,TNFR1表达较感染组减少，sTNFR1水平达到（231.23±41.04） pg/ml,较感染组明显增加。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV后，TACE和TNFR1等表达及活性与VZV感染组比较无明显差异，sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV加药组对TACE和TNFR1的表达及活性调节作用不明显，sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。结论:VZV可诱导hSC中PrPC稳定性下降，TACE活性降低。而MCbl可稳定PrPC,调节TACE活性，促进TNFR1的脱落，从而增强hSC的抗TNF-α神经毒性能力。