细菌CRISPR/Cas免疫系统的构建及功能鉴定

摘要

目的构建细菌CRISPR/Cas免疫系统表达质粒,用于细菌耐药基因水平转移的研究。方法 PCR技术分三段扩增嗜热链球菌LMD-9的CRISPR/Cas基因序列,并依次接入PACYCDuet-1质粒。以体外酶切效率评价其活性。结果经PCR扩增、测序鉴定,成功扩增了完整的CRISPR/Cas系统;在功能活性鉴定中,gRNA剪切靶点DNA酶切条带的灰度值分别为10和3,表明构建的CRISPR/Cas系统质粒具有活性。结论成功构建了细菌CRISPR/Cas免疫系统质粒,为今后用于细菌耐药基因水平转移打下了基础。