从大白芸豆种子中分离与表征一种新型凝集素WKBL

摘要

从大白芸豆种子中,经过缓冲液抽提、硫酸铵沉降、蓝胶亲和色谱(AF-Blue HC-650M)、离子交换色谱(CM-Sephadex C-25)、凝胶过滤色谱(Sephadex G-50)等步骤,分离纯化了一种具有一定抗真菌活性和抗肿瘤活性的凝集素,命名为WKBL.经SDS-PAGE显示,WKBL分子量为25 kD,N端序列为DAVLYRGPGDLHTGS,过碘酸-雪夫染色(PAS)呈红色.凝血活性实验显示,WKBL凝血效果明显,但只有在60℃以下才具有凝血活性,而pH对其活性影响并不大.D-半乳糖、D-果糖、D-葡萄糖、甘露醇能抑制WKBL的活性.WKBL为金属依赖型凝集素,LiCl、SnCl2和K2Cr2O7能抑制WKBL活性,但CaCl2、BaCl2、ZnCl2、CuCl2、FeCl3和MgCl2对WKBL活性却无影响.WKBL对白血病细胞K562的生长显示出较强的抑制作用,其IC50为15μmol/L,对HeLa细胞呈现抑制作用,对HepG2细胞的抑制作用不明显.抑菌实验显示,WKBL对瓜果腐霉病菌(Pythiumaphanidermatum)、苹果轮纹病菌(Physalospora piricola)、甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.nelonis)和葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)呈现出一定的抑制,但是其抑制率对浓度的依赖性并不高.