肺炎支原体MPN 668蛋白的克隆和表达与纯化

摘要

目的：克隆表达与纯化肺炎支原体mpn 668蛋白。方法以Mp 129株基因组DNA为模板，PCR法扩增目的基因mpn 668，将其亚克隆至pGEX-6 P-1载体中。经鉴定后将其转化至表达菌E.coli BL 21中进行诱导表达。采用SDS-PAGE和蛋白质印迹等方法对表达产物进行分析鉴定并纯化GST融合蛋白。结果成功扩增出总长度为423 bp的mpn 668基因，所构建的原核重组质粒经PCR、双酶切以及测序鉴定与预期目的基因相符。SDS-PAGE显示，IPTG可诱导一分子量约为41 kD的可溶性GST融合蛋白，经GST·BindTM Purification Kit纯化后，纯度可达95%以上。结论本研究成功克隆表达出mpn 668融合蛋白，为下一步研究其功能奠定了基础。