多重耐药肺炎克雷伯菌62种耐药基因元件的检测与gyrA以基因突变的发现

摘要

目的 调查一组临床检出的肺炎克雷伯菌可能存在的耐药基因状况,以及各菌株间可能存在的亲缘关系.方法 25株肺炎克雷伯菌均分离自2016-2017年江汉油田总医院医院住院病人标本.菌种鉴定为gyrA基因测序上网BLASTn比对法,用PCR方法检测35种β-内酰胺酶基因,15种氨基糖苷类药物耐药基因,1种喹诺酮类药物耐药相关基因和11种可移动遗传元件.再用DNA测序法分析基因突变.最后对62种耐药元件基因的检测结果作样本聚类分析(UPGMA法).结果 25株耐药肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药率低(亚胺培南、美罗培南均只有8％),对其它8种抗菌药物的耐药率较高(40％～96％).每株均检出β-内酰胺类药物耐药相关基因(总阳性率100.00％);有24株菌检出氨基糖苷类药物耐药相关基因(总阳性率96.00％);有20株菌检出喹诺酮类药物耐药相关基因gyrA突变(即突变率为80.00％);每株均检出可移动遗传元件遗传标记基因(总阳性率100.00％).共检出5种β-内酰胺酶基因(bla TEM、bla LAP、bla KPC、bla DHA群、bla OXA-1群),6种氨基糖苷类药物耐药基因(aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、ant (3”)-Ⅰ、aph3'-Ⅰ、aadA5、rmtB),20株存在喹诺酮类药物耐药相关基因gyrA第83位密码子发生了同样的突变,且均无第87位密码子的突变.检出8种可移动遗传元件(intⅠ 1、tnpU、tnp513、ISEcp1、IS26、IS903、ISKpn6、trbC),且检出率较高.样本聚类分析显示本组菌可分A与B2个簇群,2个簇群中均有克隆传播.A簇群中有2个克隆,分别为2-3-5-16等4株、13-14等2株;B簇群中有1个克隆,为19-20号2株.结论 多种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类药物耐药基因,gyrA第83位密码子突变和可移动遗传元件共同导致本组肺炎克雷伯菌对10种抗菌药物的耐药.本组肺炎克雷伯菌3个克隆传播提示可能有医院感染的存在.