恶性疟原虫ABRA基因真核表达重组质粒的构建及序列分析

摘要

目的构建恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株ABRA基因真核表达重组质粒pcDNA3-ABRA;测定ABRA基因序列,并了解FCC1/HN株与其它分离株ABRA序列的差异.方法根据ABRA基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组 DNA中扩增ABRA基因;将ABRA基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;用酶切,PCR扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆.以正确的重组质粒为模板, 用双脱氧链末端终止法测定ABRA基因序列,应用软件辅助分析ABRA序列及进行同源性比较. 结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株ABRA基因;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-ABRA重组质粒.测序表明,FCC1/HN株ABRA基因大小为2220bp,编码739 个氨基酸.恶性疟原虫FCC1/HN株与Camp,3D7,FC27株ABRA基因编码氨基酸序列主要在C-端存在少量不同;FCR3株与以上4株ABRA基因编码氨基酸序列相比,只有少量的氨基酸替换. 结论从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取ABRA基因,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-ABRA,并测定了FCC1/HN株ABRA基因的序列;FCC1/HN株与其它分离株A BRA基因有很高的同源性.