疟疾传播媒介斑须按蚊唾液腺cDNA表达基因库的构建及抗原基因的筛选

摘要

目的为寻找编码按蚊唾液腺分泌性蛋白质的基因. 方法应用RNeasy试剂盒提取斑须按蚊唾液腺总RNA;OrientExpressTM Oligo(d T)cDNA Library Construction 系统反转录合成双链cDNA,修饰后加上EcoRⅠ/Hi ndⅢ linker,经酶切、大小分馏后,与λSCREEN-1 臂相连,体外包装为λ噬菌体颗粒,构建成cDNA表达文库;在感染大肠杆菌ER1647后,检测cDNA表达文库的大小;应用兔抗唾液腺蛋白血清对部分文库进行免疫筛选,并将含cDNA片段的阳性λSCREEN克隆株转化成 pSCREEN质粒,经EcoRⅠ/HindⅢ消化后,分析cDNA片段.结果 cDNA表达文库容量为4×106/pfu.应用抗唾液腺蛋白血清筛选,获得3个阳性克隆株,酶切后cDNA片段的长度约为500pb.结论已筛选到与抗唾液腺蛋白的免疫血清反应的阳性克隆株,而且获得编码唾液腺蛋白抗原的基因片段,并将其转入pSCREE N质粒中,为进一步研究蚊唾液腺内编码分泌性蛋白质基因的作用奠定了基础.