重组柯萨奇B3病毒VP1基因的穿梭表达载体的构建及鉴定

摘要

目的构建重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌-酵母菌穿梭表达载体pGBKT7-VP1.方法用PCR从质粒pT7-CV3-5.5中扩增柯萨奇B3病毒VP1基因,经Nde Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切后,定向插入细菌-酵母菌穿梭表达载体pGBKT7中完成质粒构建.用酶切和测序鉴定构建质粒.结果限制性内切酶酶切和序列分析表明VP1巳成功插入pGBKT7载体的多克隆位点,克隆方向和阅读框与病毒VP1基因一致.结论本研究成功构建VP1基因的细菌-酵母菌穿梭表达载体pGBKT7-VP1,为研究VP1蛋白与其宿主细胞之间的相互作用奠定了基础.