福建省1株登革Ⅱ型病毒的鉴定

摘要

目的 对2005年福建省分离的1株登革病毒(DV)进行鉴定,并从分子水平追踪其可能的传染源.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测疑似登革热患者血清中DV-IgM、IgG抗体;同时应用C6/36细胞、单克隆抗体间接免疫荧光(McAb-IFA)、逆转录-套式PCR法分别进行病毒的分离和鉴定,并对分离株的部分基因进行核苷酸序列分析.结果 患者血清登革病毒特异性IgM抗体阳性、IgG抗体可疑,表明该患者在近期感染过登革病毒.患者血清接种C6/36细胞,观察到登革病毒特有的CPE.受感染的C6/36细胞能与登革病毒Ⅱ型单克隆抗体反应,表明分离的病毒株为登革Ⅱ型病毒.分离株的核酸提取物经RT-PCR扩增,登革病毒通用引物可扩增出511bp的特异性条带,型特异性引物扩增出119bp的特异性条带,进一步证实分离的病毒株为登革Ⅱ型病毒.分离株RT-PCR扩增产物的核苷酸序列与30株不同地域来源的登革Ⅱ型病毒相应序列构建的系统发生树表明,此毒株与东南亚地区的毒株比较接近.此次分离株的序列与1999年登革Ⅱ型病毒福建株的对应序列在亲缘关系上有一定程度距离.结合流行病学调查资料,进一步确定此病例为输入性感染病例.结论 福建省首次从输入性登革热患者血清中分离出登革Ⅱ型病毒,该病毒来源于东南亚地区.