表达猪源流感病毒HA基因重组伪狂犬病毒的构建

摘要

目的 获得共表达H1N1和H3N2亚型猪源流感病毒(SIV) HA 基因的重组伪狂犬病毒(PRV).方法 克隆H1N1以及H3N2亚型SIV的HA基因,将HA基因与PUC-TK转移载体进行酶切、连接来构建pUC-P-H1A-H3A重组表达质粒,用脂质体将其转染已感染PRV亲本病毒的Vero细胞,使其在Vero细胞内与PRV基因组发生同源重组.运用RT-PCR、间接免疫荧光等方法检测外源基因重组情况及其在Vero细胞内的表达,并通过Western-blot对表达产物进行免疫原性鉴定.结果 实验结果显示,外源基因HA已重组入PRV基因组,并在Vero细胞中有效表达,且所表达蛋白具有免疫原性.结论 HA基因重组PRV的构建成功为SIV HA基因重组PRV活载体疫苗的研究奠定了初步基础.