DHPLC方法检测并定量线粒体DNA 1555A>G异质性突变

摘要

目的建立一种可靠、灵敏的DHPLC方法检测并定量线粒体DNA 1555A>G异质性突变。方法采用克隆技术构建已知突变负荷的标准品，以此为实验材料，对影响DHPLC仪器检测准确性的主要因素进行探索和优化，建立最佳的DHPLC检测条件。收集氨基糖甙类药物性耳聋患者10例，听力正常的家属成员40例，使用DHPLC方法检测并定量其异质性水平，并与传统的检测方法PCR-RFLP和直接测序法进行对比验证。结果获得已知突变负荷的标准品，建立了一套最优的DHPLC方法检测并定量1555A>G异质性突变。在10例患者中，DHPLC共检出6例异质性突变个体，而利用传统的检测方法只检出4例；此外，在经传统检测方法确认为野生型的40例对照中，采用DHPLC方法又检出2例低水平的异质性突变个体。结论DHPLC可以作为一种可靠、灵敏的筛选异质性突变的方法，能够快速准确的对线粒体DNA 1555A>G异质性突变进行检测并定量。