毛蕊花糖苷通过下调TGF-β抑制胶质母细胞瘤上皮间质转化的实验研究

摘要

目的探讨毛蕊花糖苷（VB）对胶质母细胞瘤细胞上皮间质转化的作用及分子机制。方法 （1）实验1:常规培养胶质母细胞瘤T98和U251细胞并各自分为4组,依次添加0、20、40、80 μmol/L的VB处理24 h。采用CCK-8实验检测4组细胞存活率;采用Transwell实验检测4组细胞迁移、侵袭情况;采用RT-PCR实验及Western blotting实验检测4组细胞转化生长因子-β（TGF-β）、波形蛋白、Snail蛋白mRNA及蛋白表达情况。（2）实验2:T98、U251细胞各分为4组,依次为对照组、VB组、TGF-β组和TGF-β+VB组。对照组及VB组细胞转染空载质粒、TGF-β组及TGF-β+VB组细胞转染TGF-β质粒;转染24 h后VB组、TGF-β+VB组细胞均加入40 μmol/L VB继续培养24 h,随后进行后续实验（迁移和侵袭实验、Western blotting实验,实验方法及检测指标同实验1）。（3）体内实验:裸鼠皮下种植U251细胞后分为2组,每组8只。实验组每天腹腔注射100 mg/kg的VB,对照组注射等量的PBS。记录小鼠肿瘤体积大小和小鼠体质量的变化;实验终点（移植后21 d）时,检测小鼠肿瘤重量并采用Western blotting实验检测肿瘤中TGF-β、波形蛋白、Snail的表达。结果 （1）实验1:与0 μmol/L VB组相比较,20 μmol/L、40 μmol/L VB组的细胞存活率差异无统计学意义（P＆0.05）,而80 μmol/L VB组细胞存活率下降,差异有统计学意义（P＆0.05）;与0 μmol/L VB组比较,20和40 μmol/L VB组迁移和侵袭到下室的细胞随浓度的增高而减少,TGF-β、波形蛋白、Snail蛋白的mRNA和蛋白表达水平也依次降低,差异有统计学意义（P＆0.05）。（2）实验2:与对照组相比较,VB组细胞迁移和侵袭的细胞数量减少,TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达下调,差异有统计学意义（P＆0.05）;而TGF-β组细胞迁移和侵袭的细胞数量增加,TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＆0.05）;与VB组比较,TGF-β组及TGF-β+VB组细胞迁移和侵袭的细胞数量增加,TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达上调,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（3）体内实验:与对照组相比,实验组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量更小,TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白表达量更小,差异均有统计学意义（P＆0.05）;但2组小鼠的体质量差异无统计学意义（P＆0.05）。结论 VB通过下调TGF-β的表达而抑制胶质母细胞瘤的上皮间质转化。