格列苯脲调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠的神经血管单元

摘要

目的 探讨磺酰脲类受体1（SUR1）-转化受体电位阳离子通道亚家族M成员4（TRPM4）特异性抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元的保护作用及其机制。方法 采用随机数字表法将120只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组及格列苯脲组,每组40只。后2组采用线栓法制备成急性局灶性大脑中动脉闭塞缺血2 h再灌注模型,其中模型组于缺血2 h后给予单次腹腔注射含0.05%二甲基亚砜的生理盐水,格列苯脲组给予单次腹腔注射10 μg/kg格列苯脲（5 μg/mL）。再灌注后8 h时,采用免疫荧光双标染色及Western blotting检测各组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4的表达,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）含量。再灌注后24 h时,采用Zea Longa评分法评估各组大鼠的神经功能缺损程度,采用干湿重法检测脑组织含水量,采用伊文思蓝（EB）染色检测血脑屏障通透性,采用尼氏染色检测脑组织中存活神经元数量,采用免疫组化染色检测IgG渗出量及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）、环氧化酶-2（COX-2）阳性细胞的表达,采用Western blotting检测热休克蛋白70（HSP70）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）蛋白的表达。结果 （1）再灌注后8 h时,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义（P＆0.05）,且该两种蛋白存在共定位；与模型组比较,格列苯脲组的SUR1、TRPM4蛋白表达降低,但差异无统计学意义（P＆0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠的MMP-9含量明显升高,差异有统计学意义（P＆0.05）；与模型组比较,格列苯脲组的MMP-9含量明显降低,差异有统计学意义（P＆0.05）。（2）再灌注后24 h时,与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能缺损评分明显升高,脑组织含水量明显升高,EB渗出量明显升高,IgG渗出量明显升高,尼氏染色阳性神经元数量明显降低,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显升高,HSP70、p-Akt蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）；与模型组比较,格列苯脲组的神经功能缺损评分明显降低,脑组织含水量明显降低,EB渗出量明显降低,IgG渗出量明显降低,尼氏染色阳性神经元数量明显升高,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显降低,HSP70、p-Akt蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 SUR1-TRPM4在脑缺血再灌注损伤后表达升高,而其抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤诱导的神经元及血脑屏障等神经血管单元损伤具有一定的保护作用,机制可能与调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路有关。