pEGFP-N1-GGF2质粒的构建及其在大鼠脑内的表达

摘要

目的构建pEGFP-N1-GGF2质粒,观察其在大鼠脑组织中的表达。方法采用RT-PCR方法从人胚胎脑组织总RNA中扩增出人GGF2全长序列,并克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEGFP-N1-GGF2质粒,通过脂质体将pEGFP-N1-GGF2质粒转染大鼠脑组织,荧光显微镜下观察GGF2融合蛋白在大鼠脑内表达的时间和空间分布特征。结果成功构建了pEGFP-N1-GGF2表达载体,荧光显微镜观察可见,pEGFP-N1-GGF2表达载体转染6 h大鼠脑内即可见GGF2融合蛋白表达,3 d时融合蛋白表达最多,7 d时表达量稍有下降但仍高,14 d时表达量已明显下降。GGF2融合蛋白在脑内的表达以针道为中心向周围扩散,荧光信号可达皮层深部。结论脂质体介导的pEGFP-N1-GGF2质粒能够在大鼠脑内表达GGF2融合蛋白。