IL-10基因转染对大鼠脑缺血再灌注损伤半影区钠氢交换器-1基因表达的影响

摘要

目的观察SA脂质体介导人自介素-10（hIL-10）基因转染对脑缺血再灌注损伤模型大鼠半影区钠氢交换器-1（NHE-1）基因表达的影响,探讨IL-10缺血脑保护的作用机制。方法成年雄性SD大鼠78只按随机数字表法分为正常对照组（6只）、缺血对照组（24只）、hIL-10基因转染组（24只）、空质粒组（24只）。采用Longa法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。正常对照组不做任何操作;缺血对照组仅做大脑中动脉阻塞（MCAO）模型和立体定向操作,不注射任何药物;hIL-10基因转染组和空质粒组在建立MCAO模型后,采用立体定向方式分别将SA脂质体/pcDNA3.1-hIL-10混合物或SA脂质体/pcDNA3.1混合物注射入大鼠侧脑室内。24、72、168h分别用RT-PCR和ELISA检测其转染效果,TTC染色测定脑梗死体积,采用荧光实时定量PCR技术观察各组大鼠脑组织中NHE-1 mRNA和核转录因子NF-κB mRNA的表达水平。结果（1）RT-PCR结果:hIL-10基因转染组大鼠在缺血再灌注72 h时,其皮层和海马中均能检测到hIL-10mRNA的表达,而正常对照组、缺血对照组和空质粒组中则不能检测到hIL-10 mRNA。ELISA结果:基因转染后24h（764.63±87.88）脑组织中hIL-10蛋白与正常对照组（81.23±8.61）比较明显升高,72 h（1310.21±86.19）较24 h更高,但到168 h（541.32±80.77）时已明显下降,但仍高于缺血对照组和空质粒组差异均有统计学意义（P＜0.05）。同时hIL-10基因转染组大鼠脑梗死体积明显小于缺血对照组和空质粒组差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）正常对照组、缺血对照组、空质粒组和hIL-10基因转染组NF-κB mRNA的表达量分别为1.00±0.33、4.76±0.41、4.58:±0.62和2.77:±0.43。与正常对照组相比,其它三组NF-κB mRNA的表达量均升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,但hIL-10基因转染组的升高水平低于缺血对照组和空质粒组,差异有统计学意义（P＜0.01）。（3）正常对照组、缺血对照组、空质粒组和hIL-10基因转染组NHE-1 mRNA的表达量分别为1.00±0.22、4.16±±0.48、3.97±0.51和2.82±0.47。与正常对照组相比,后三组NHE-1mRNA的表达量均升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,其中hIL-10基因转染组的升高水平低于其它两组差异有统计学意义（P＜0.01）。结论hIL-10基因转染可能通过抑制脑缺血再灌注引起的NHE-1基因表达的增加而发挥缺血脑保护作用。