遗传性脊髓小脑性共济失调致病基因病理核苷酸重复序列检测方法的研究

摘要

目的建立遗传性脊髓小脑性共济失调（SCA）亚型中核苷酸重复序列稳定、准确、直观的检测技术方法和平台。方法运用荧光聚合酶链反应、8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管凝胶电泳、重组DNA结合直接测序等技术对50例诊断为SCA3/MJD患者的CAG三核苷酸病理重复次数进行检测,并对运用毛细管凝胶电泳和重组DNA两种方法得到的不同的CAG病理重复次数进行对比分析。结果 50例8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为SCA3/MJD的患者.毛细管凝胶电泳检测方法得到的CAG三核苷酸病理重复次数范围为63～74次,平均（69.56±2.12）次;重组DNA结合直接测序得到的CAG三核苷酸病理重复次数范围为67～80次,平均（73.72±3.29）次。毛细管凝胶电泳计算所得到的CAG三核苷酸病理重复次数有减少的趋势,和应用重组DNA技术得到的结果相比差异有统计学意义（t=9.610,P=0.000）。结论变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管凝胶电泳可以对核苷酸重复序列进行初步筛选,最终重复核苷酸序列的确定仍需要直接测序;重组DNA结合直接测序技术是检测SCA各亚型核苷酸重复次数和分析核苷酸多态性的一种稳定、准确和直观的技术方法。