红色荧光基因慢病毒转染人脑胶质瘤干细胞的实验研究

摘要

目的建立体外稳定表达红色荧光蛋白（RFP）的人脑胶质瘤干细胞。方法将含有RFP基因的慢病毒（RFP-lentivirus）转染体外培养的人脑胶质瘤于细胞SU2,荧光显微镜下观察红色荧光表达情况;流式细胞仪测定转染前SU2细胞、转染后RFP-SU2细胞传代培养20代后红色荧光转染率;动态观察RFP-SU2单细胞的分裂及克隆形成情况;免疫荧光染色检测RFP-SU2细胞CD133、nestin的表达。结果 RFP-SU2呈悬浮球状生长,RFP呈高表达。转染前SU2细胞的红色荧光转染率仅为1.5%,转染并克隆培养20代后RFP-SU2细胞红色荧光转染率达75%。RFP-SU2单细胞仍可增殖形成脑肿瘤干细胞球,具有自我更新和克隆增殖能力。免疫荧光染色检测显示RFP-SU2细胞中CD133、nestin表达阳性。结论以RFP为生物标记物的人脑胶质瘤干细胞成功建立,可为将来人脑胶质瘤干细胞的深入研究提供理想的材料。