Notch信号通路通过调控Snail/E-钙黏蛋白参与肝细胞肝癌侵袭迁移的机制

摘要

目的探讨Notch信号通路在肝癌（HCC）细胞侵袭迁移中的作用机制。方法分别用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测肝癌细胞株HepG2和非肿瘤肝细胞株HL-7702中Snail和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的mRNA和蛋白表达;Western blot检测NICD蛋白的表达;200μmol小干扰RNA（siRNA）-Snail和5μmol/L DAPT分别处理HepG2后,RT-PCR和Western blot检测Snail和E-cadherin的mRNA和蛋白表达;Transwell小室检测各处理组细胞的侵袭、迁移能力。结果 HepG2中Snail mRNA和蛋白的表达均高于非肿瘤肝细胞株HL-7702（0.11±0.06比0.08±0.02、0.46±0.06比0.21±0.04）,差异有统计学意义（P=0.021、0.032）,E-cadherin mRNA和蛋白的表达低于HL-7702（0.47±0.11比0.83±0.05、0.17±0.03比0.25±0.06）,差异有统计学意义（P=0.012、0.004）。与siRNA阴性对照组比较,siRNA-Snail组Snail mRNA（0.76±0.13比0.25±0.06,P=0.031）和蛋白（0.81±0.24比0.27±0.08,P=0.024）表达显著降低,E-cadherin mRNA（0.33±0.06比0.85±0.18,P=0.015）和蛋白（0.14±0.02比0.52±0.07,P=0.031）的表达显著上调,细胞侵袭（93.42±12.33比39.66±8.33,P=0.011）、迁移（375.66±65.21比98.52±12.76,P=0.008）能力均明显下降。HepG2中NICD蛋白的表达明显高于HL-7702（0.26±0.04比0.11±0.02）,差异有统计学意义（P=0.004）。与NT组比较,Notch信号通路特异性γ-分泌酶抑制剂（GSI）抑制剂DAPT能够降低NICD蛋白的表达（0.22±0.05,0.12±0.02,P=0.020）,说明DAPT能够有效抑制Notch信号通路的活化。DAPT能有效抑制Snail mRNA（0.56±0.08比0.23±0.05,P=0.004）和蛋白(0.72±0.06比0.27±0.04,P=0.030的表达,上调E-cadherin mRNA（0.21±0.03比0.54±0.06,P=0.011）和蛋白（0.32±0.07比0.77±0.08,P=0.021）的表达,同时能够抑制肝癌细胞的侵袭（87.33±9.33比32.21±6.63,P=0.008）、迁移（384.23±43.33比78.31±9.33,P=0.012）。结论 Notch信号通路在肝癌侵袭迁移过程中起重要作用,其作用机制是通过调控Snail/E-cadherin来实现的。