PCR反向线点杂交鉴定常见念珠菌的研究

摘要

目的建立PCR反向线点杂交技术（PCR-RLB）快速检测和鉴定常见念珠菌的方法。方法以念珠菌属间隔序列Ⅱ（ITS2）为靶基因设计通用引物,用生物素标记反义引物,PCR扩增白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念珠菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交,并进行临床标本和分离株的检测。结果念珠菌标准菌株可扩增出302～441 bp DNA片段,6种特异性寡核苷酸探针可分别与相应念珠菌PCR产物杂交,其敏感性为10 cfu/mL。通过对100例分离株的检测,然后与培养法鉴定（Merieux Vitek）的结果比较,有97株与培养结果一致,另外3株通过DNA测序结果证实与PCR-RLB测定结果一致。通过对200例女性阴道拭子进行检测,PCR-RLB阳性率为49%,而涂片法和培养法阳性率分别为27%和39%,明显高于涂片法和培养法（P＜0.05）。结论该方法可快速、敏感、准确鉴定临床上常见的念珠菌。