β联蛋白对体外过氧化氢所致人皮肤成纤维细胞衰老表型的影响

摘要

目的观察高表达的β联蛋白对体外过氧化氢（H2O2）所致正常人皮肤成纤维细胞（NHSF）衰老表型的影响。方法 NHSF分别转染pcDNA3.1-β联蛋白或空载体pcDNA3.1,然后150μmol/L H2O2处理2 h。实验分为转染H2O2处理组（NHSF+β联蛋白+H2O2）、转空载体H2O2处理组（NHSF+空载体+H2O2）以及转空载体组（NHSF+空载体）。用RT-PCR和Western印迹分析β联蛋白的表达,显微镜观察细胞形态,试剂盒检测衰老相关的β半乳糖苷酶（SA-β-gal）、细胞活性氧（ROS）以及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。所有数据均用SPSS 13.0软件进行统计分析,多组间比较采用ANOVA检验。结果 pcDNA3.1-β联蛋白明显上调了NHSF中β联蛋白的表达。NHSF+空载体+H2O2组β联蛋白mRNA和蛋白水平（与GAPDHmRNA和蛋白的比值分别为0.2900±0.0195和0.3130±0.0171）明显低于NHSF+空载体组（分别为0.5963±0.0400和0.6190±O.0090）,两组比较,均P＜0.05;NHSF+β联蛋白+H2O2组β联蛋白表达水平（0.7953±0.0074）高于NHSF+空载体+H2O2组（P＜0.05）。SA-β-gal染色率在NHSF+空载体组、NHSF+空载体+H2O2组、NHSF+β联蛋白+H2O2组分别为（2.9667±0.2517）%、（37.70±O.9539）%、（29.330±0.6359）%,各组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。NHSF+空载体、NHSF+空载体+H2O2、NHSF+β联蛋白+H2O2组ROS活性分别为（50.9963±9.2688）%、（109.9190±11.5215）%、（75.1063±3.0138）%,SOD水平分别为（88.0856±3.9181）、（35.5585±3.4438）、（61.7029±3.1716）U/mg,各组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论高表达的β联蛋白能够抑制细胞衰老相关β-半乳糖甘酶（SA-β-gal）和细胞活性氧（ROS）的表达,同时上调了SOD的活性。