衰老标记蛋白30对过氧化氢所致人皮肤成纤维细胞衰老表型的影响

摘要

目的 观察高表达的衰老标记蛋白30(SMP30)对过氧化氢(H2O2)所致的正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老表型的影响.方法 实验分为转染H2O2处理组(NHSF+ SMP30+ H2O2组)、转空载体H2O2处理组(NHSF+空载体+H2O2组)和转空载体组(NHSF+空载体组).NHSF细胞分别转染入SMP30 cDNA或空载体pcD-NA3.1(分别命名为NHSF+ SMP30、NHSF+空载体),然后150 μmol·L-1H2O2处理2h.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法分析SMP30的表达,显微镜观察细胞形态,并检测与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)、细胞活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果 人SMP30 cDNA明显上调了NHSF中SMP30的表达.NHSF+空载体+H2O2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平明显低于NHSF+空载体组(P＜0.05);NHSF+SMP30+ H2O2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平高于NHSF+空载体+H2O2组(P＜0.05).NHSF+空载体+H2O2组较NHSF+空载体组SA-β-gal染色率明显增高(P＜0.05);NHSF+ SMP30+ H2O2组较NHSF+空载体+H2O2组SA-β-gal染色率明显下降(P＜0.05).NHSF+空载体+H2O2组较NHSF+空载体组ROS活性明显增高(P＜0.05),而SOD水平明显降低(P＜0.05);NHSF+ SMP30+ H2O2组较NHSF+空载体+H2O2组ROS活性明显下降,而SOD水平明显上升(P＜0.05).结论 高表达的SMP30能够抑制细胞SA-β-gal和ROS的表达,同时上调SOD的活性.