尿紧张素Ⅱ诱导人皮肤成纤维细胞增殖和α平滑肌肌动蛋白表达的机制研究

摘要

目的探讨尿紧张素Ⅱ（UⅡ）对体外培养人正常皮肤成纤维细胞（NF）增殖和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的生物学功能影响及调控机制。方法原代培养NF, 采用反转录PCR和Western印迹法分别检测UⅡ及其受体mRNA和蛋白表达水平。采用CCK8法观察不同浓度（10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L）UⅡ作用0、6、12、24、48 h对NF增殖的影响, 筛选出UⅡ最佳作用浓度为10-8 mol/L, 刺激时间为24 h。将NF分为5组:对照组（不含UII）、UⅡ组、UⅡ +尼卡地平（钙通道阻断剂, 10-5 mol/L）组、UⅡ + PD98059[丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）抑制剂, 10-5 mol/L]组和UⅡ +环孢素[钙蛋白激酶（CaM PK）阻断剂, 10-5 mol/L]组, UⅡ浓度均为10-8 mol/L, 刺激NF 24 h后, 采用CCK8法检测各组NF的增殖活性, 以实时定量荧光PCR和Western印迹法分别检测各组α-SMA mRNA与蛋白的相对表达水平。结果 NF表达UⅡ受体, 不表达UⅡ。对照组、UⅡ组、UⅡ +尼卡地平组、UⅡ+ PD98059组和UⅡ +环孢素组NF细胞增殖活性（A450值）分别为1.036 ± 0.046、1.405 ± 0.158、1.121 ± 0.109、1.192 ± 0.089和1.141 ± 0.056, 组间差异有统计学意义（F = 9.587, P ＆ 0.01）, UⅡ组高于对照组、UⅡ +尼卡地平组、UⅡ+ PD98059组、UⅡ+环孢素组（q值分别为8.263、6.355、4.774、5.912, 均P ＆ 0.05）。5组间NF细胞α-SMA mRNA与蛋白的相对表达量差异亦均有统计学意义（F值分别为6.351、7.045, 均P ＆ 0.01）, 且UⅡ组α-SMA mRNA及蛋白表达量均高于另4组（均P ＆ 0.05）。结论 UⅡ可能通过钙通道、MAPK和CaM PK通路诱导NF增殖和α-SMA的表达。