白细胞介素2基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性黑素瘤细胞的杀伤作用

摘要

目的探讨白细胞介素2（IL-2）基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对恶性黑素瘤的杀伤能力。方法提取小鼠脾细胞, 分离淋巴细胞, 培养CIK细胞, 用携带IL-2的质粒PEGF-N1-IL-2转染CIK细胞, 荧光显微镜观察质粒转染情况, 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定IL-2基因的表达。将效应细胞（CIK细胞或IL-2转染CIK细胞）和靶细胞（B16黑素瘤细胞）分别按照效靶比10∶1、20∶1和40∶1混合培养, 采用4 h乳酸脱氢酶释放测定法, 检测两种CIK细胞对B16细胞的细胞毒活性。按照效靶比40∶1混合, 采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两种CIK细胞IL-2、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。建立小鼠黑素瘤模型, 将28只模型小鼠平均分为4组:对照组（瘤旁注射0.2 ml生理氯化钠溶液）、IL-2组（瘤旁注射100 IU IL-2）、CIK组（瘤旁注射细胞数约1 × 106 CIK细胞悬液）、IL-2转染CIK组（瘤旁注射细胞数约1 × 106 IL-2转染CIK细胞悬液）, 通过肿瘤形态学和抑瘤率、细胞凋亡率来评价荷瘤小鼠肿瘤生长情况。两组正态分布计量资料的比较行t检验, 多组计量资料的比较采用方差分析, 两两间多重比较采用LSD-t检验。结果荧光显微镜及RT-PCR均显示IL-2转染CIK细胞成功。效靶比实验显示, 40∶1时IL-2转染CIK细胞对B16细胞的毒性最强, IL-2转染CIK细胞组分泌IL-2（1107.26 ± 6.49 pg/ml）、IFN-γ（50.01 ± 3.35 pg/ml）和TNF-α（39.86 ± 3.25 pg/ml）的能力明显高于CIK细胞组（分别为51.09 ± 3.85、32.71 ± 2.43、30.11 ± 3.08 pg/ml）, 两组比较, t值分别为442.60、14.93和6.89, 差异均有统计学意义（P ＆ 0.01）。动物实验显示, 与干预前相比, 干预后对照组小鼠肿瘤体积明显增大（P ＆ 0.05）, 而IL-2组、CIK组和IL-2转染CIK组小鼠肿瘤体积明显减小（P ＆ 0.001）, 且IL-2转染CIK组肿瘤体积显著小于其他3组（均P ＆ 0.01）, 但IL-2组和CIK组差异无统计学意义（P ＆ 0.05）。CIK组、IL-2组和IL-2转染CIK组的细胞凋亡率均显著大于对照组（P ＆ 0.01）, IL-2转染CIK组的细胞凋亡率及抑瘤率均显著大于IL-2组和CIK组（P ＆ 0.01）, 而IL-2组和CIK组细胞凋亡率及抑瘤率差异无统计学意义（P ＆ 0.05）。结论 IL-2转染CIK细胞对恶性黑素瘤有更强的杀伤作用。