梅毒螺旋体体内诱生抗原Tp0462的表达鉴定及在临床血清学诊断中的应用评价

摘要

目的筛选鉴定并评价梅毒螺旋体（Tp）体内诱生抗原Tp0462的临床血清学诊断价值。方法提取Tp Nichols株全基因组, PCR扩增Tp0462, 克隆构建重组质粒pET30a（+）-Tp0462, 转化至E.coli Rosetta（DE3）菌, 大量诱导表达重组蛋白Tp0462并纯化、鉴定。18只新西兰兔随机平均分为活Tp接种组、紫外线照射灭活Tp接种组和未接种对照组, 接种后不同时间点抽血分离血清, 用ELISA鉴定Tp0462蛋白的体内诱生性特点。ELISA法（Tp0462-ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、梅毒初筛ELISA试验及快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）试验检测336份临床梅毒患者血清样本, 初步评价该蛋白的诊断价值。结果重组质粒Tp0462-pET30a（+）在E.coli Rosetta（DE3）中最适的表达条件为0.5 mmol/L IPTG, 20 ℃, 180 rpm摇床诱导培养4 h。活Tp接种组血清Tp0462特异性抗体水平从第2周起呈急剧上升趋势, 至5周后趋于平稳, 而灭活Tp接种组及未接种对照组血清Tp0462特异性抗体水平一直处于低水平。活Tp接种组Tp0462特异性抗体水平显著高于灭活Tp接种组及未处理组（P ＆ 0.05）, 而灭活Tp接种组与未处理组相比, 差异无统计学意义（P = 0.256）。活Tp接种组、灭活Tp接种组Tp92抗体水平显著高于未处理组（P ＆ 0.05）, 而活Tp接种组与灭活Tp接种组差异无统计学意义（P = 0.127）。与TPPA相比, Tp0462-ELISA的灵敏度和特异度分别为91.7%和98.8%, 符合率为95.2%, 曲线下面积为0.997。Tp0462-ELISA与梅毒初筛ELISA试验的符合率为92.3%, Kappa值为0.846;与RPR试剂盒的符合率为83.9%, Kappa值为0.293。结论 Tp0462在梅毒血清学诊断中具有较高的灵敏度和特异度, 可以作为潜在的梅毒诊断候选蛋白。