竞争性聚合酶链反应定量检测沙眼衣原体

摘要

为了便于研究沙眼衣原体（ＣＴ）感染的致病机理，我们建立了一种竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）定量检测ＣＴ的方法。合成、克隆并定量了一与ＣＴ主要外膜蛋白基因（ｏｍｐｌ）靶序列具有相同引物位点的内参标（ＩＳ），通过共同扩增已知数量克隆的ＣＴｏｍｐｌ野生型模板和ＩＳ，构建竞争性ＰＣＲ标准曲线。恒定拷贝数（１０００个分子）的ＩＳ与每一待测模板共同扩增，用靶序列与ＩＳ的ＰＣＲ产物的密度比值定量标本中的ＣＴ。对１１份培养阳性的泌尿生殖道标本进行了ＣＴ的定量检测。结果发现，一个培养包涵体形成单位大约相当于７５个ＤＮＡ分子。研究表明：竞争性ＰＣＲ提供了一种可靠且敏感、可定量临床标本中ＣＴ的方法。