PCR-ELISA检测HBV?DNA方法学建立及初步临床应用

摘要

建立PCR-ELISA检测HBV DNA的方法学,探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值.常规PCR引物用地高辛标记,使扩增产物带有地高辛标记成份,再通过亲合素-生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯板小孔中,通过固相探针与HBV DNA扩增产物进行杂交,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应,经NPP显色,根据其A405 nm值大小,推算样品中HBV DNA模板含量.建立PCR-ELISA的最佳实验条件为PCR循环次数为30次,杂交温度37 ℃,杂交时间1 h,批内变异系数为9.4%,批间变异系数16.9%,在60例乙肝患者血清标本检出率为70%(42/60),而常规凝胶电泳检出率为46.7%(28/60),两者具有显著性差异(χ2=6.67 P<0.01).