黑鲷(Acanthopagrus schlegeli) CXC型趋化因子的体外表达及其生物学活性

摘要

采用DNA体外重组技术,将一个黑鲷CXC趋化因子基因亚克隆到pQE30表达载体并转化到大肠杆菌(M15)中诱导表达后,利用pH递降的缓冲液从金属亲和柱洗脱含6xHis标签蛋白的方法得以纯化,纯化产物的分子量约为8kDa,表达量约占蛋白总量的25%,以6xHis单抗为一抗,采用Western-blotting方法鉴定获得的蛋白为目的蛋白.对表达产物进行生物活性鉴定表明,该蛋白具有显著的嗜中性粒细胞和巨噬细胞的趋化活性(P<0.01,P<0.05),它对嗜中性粒细胞和头肾巨噬细胞的趋化能力呈剂量依赖性,且对嗜中性粒细胞的趋化能力大于对头肾巨噬细胞的作用,还能诱导改变嗜中性粒细胞和巨噬细胞对细菌的吞噬活性,但对嗜中性粒细胞吞噬能力的改变小于巨噬细胞.该趋化性因子在结构和功能上属不完全ELR+CXC型趋化因子,兼具ELR+CXC和ELR-CXC趋化因子的活性,是一种不成熟ELR+CXC型趋化因子.