siRNA多位点逆转人神经胶质瘤细胞的多药耐药性

摘要

背景与目的:多药耐药性的产生严重影响了胶质瘤的化疗效果,RNAi是近年来兴起的一种基因技术,介导了转录后的基因沉默过程.本研究探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人神经胶质瘤细胞U251的多药耐药(muhi-drug resistance,MDR)性的影响.方法:体外构建了2对靶向多药耐药基因(MDR1)的siRNA和1对非特异siRNA,与阳离子脂质体构建转染复合体,转染至U251细胞株,荧光标记筛选转染条件;采用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和Western blot检测MDR1 mRNA和P-gp(P-glycoprotein,P-gp)蛋白的表达;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性.结果:RT-PCR显示转染siRNA后48 h各组MDR1 mRNA的表达水平分别下降了(48±7)%、(29±5)%、(11±6)%;Western blot显示各组P-gp的相对表达也明显降低了(74±4)%、(39±5)%、(20±7)%;药敏结果显示转染后,逆转了细胞对VCR、BCNU、Me-CCNU的耐药(IR＞30%),增强了细胞对PTX、EPI的敏感性(IR＞50%).2对特异siRNA均能明显降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,siRNA1转染的U251细胞对化疗药物的敏感性增强.结论:本研究结果提示,siRNA可多位点逆转U251细胞的多药耐药性,为提高胶质瘤的化疗有效率提供了一种新方法.