RNAi下调Six1基因对人骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响

摘要

背景与目的:Sixl(sine oculis homeobox homolog 1)基因的编码产物属于复合同源异犁蛋白家族一员,主要参与中枢神经系统、眼、肾、肌肉等组织器官的发育.最新的研究表明six1也参与了调控转录和细胞周期,进而发现与恶性肿瘤的发生及转移相关.在骨肉瘤中,Six1的功能还未完全明确.本研究拟对Six1在人骨肉瘤细胞增殖和转移中所发挥的作用进行初步探讨.方法:以人骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对其Six1基因序列设计小干扰RNA片段,筛选出能高效沉默目标基因的片段序列后,重组其短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,转染入细胞,筛选出稳定表达干扰质粒的细胞克隆.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)方法分别检测转染后Six1的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,并将肿瘤细胞注入裸小鼠体内进行肿瘤转移的观察.结果:RT-PCR和Western blot显示shRNA对Six1在基因和蛋白水平均有显著的下调作用.骨肉瘤细胞的生长速度减慢,处于G2-M期的细胞比例由25.62%±1.81%下降为18.25%±1.56%,处于G1期的细胞比例由57.31%±2.11%上升N65.51%±2.65%.裸鼠转移瘤实验发现转移瘤的抑制率为69.5%. 结论:下调Six1基因后,骨肉瘤细胞的增殖和转移能力都得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗骨肉瘤的靶点之一.